Экспресс-методы диагностики холеры

Чувствительность к монофагам

Гемолиз эритроцитов барана

Примечание: ХДФ холерный диагностический фаг.

Фаготипирование энтеротоксигенных неагглютинирующих вибрионов (наг) не 01 группы типовыми бактериями тэпв к энтеропатогенным вибрионам

Фаготипы вибрионов НАГ

Примечание: ТЭПВ – типовые фаги к энтеропатогенным вибрионам НАГ. Типируют методом агаровых слоев.

Методика: испытуемую культуру засевают в пробирку с 4 мл МПБ, инкубируют при + 37 о С в течение 3 часов. Затем 0,3 мл бульонной культуры вносят в пробирку с 4 мл. 0,7% расплавленного и остуженного до + 45 о С МПА, перемешивают и выливают вторым тонким слоем в стерильную чашку с первым застывшим слоем 2% МПА, после этого на поверхность МПА петлей или каплей из пипетки наносят типовые бактериофаги в цельном виде, а при необходимости – в разведении от 10 -1 до 10 -4 . Каплям фага дают подсохнуть, впитаться, после чего пробы помещают в термостат при +37 о С на 4-18 часов. Контроль – физ.раствор.

Учет результатов ведут при наличии стерильных пятен в связи с лизисом чувствительных к фагу культур. В контроле и при нечувствительности культуры лизиса нет.

Ускоренный метод. Из подготовленной бульонной культуры делают штриховой высев на 8 секторов МПА, а сверху наносят бактериофаг. Режим инкубации и учет результатов те же.

Для продолжения скачивания необходимо собрать картинку:

Экспресс-методы диагностики холеры

Дифференциальную диагностику проводят с пищевыми токсикоинфекциями, шигеллёзом, сальмонеллезом, гастроэнтеритическим вариантом дизентерии, эшерихиозом, вирусными диареями, отравлениями бледной поганкой, ядохимикатами, солями тяжёлых металлов и другими диарейными инфекциями и отравлениями с поражением пищеварительного тракта. При этом главную роль играют данные эпиданамнеза (пребывание в странах, неблагополучных по холере, контакт с лицами, прибывшими из этих стран, особенно при наличии у них диареи, употребление воды из открытых водоисточников, использование необеззараженной воды для мытья рук, посуды, фруктов и овощей, употребление не прошедшего термическую обработку свежего молока).

Холера протекает без развития гастрита и энтерита, и лишь условно можно относить ее к группе инфекционных гастроэнтеритов. Из клинических особенностей холеры основное значение имеют: отсутствие интоксикационного синдрома, лихорадки, болей в животе или слабая их выраженность, отсутствие болезненности при пальпации живота, характер испражнений (обилие, бескаловый характер), внешний вид рвотных масс и испражнений, напоминающих рисовый отвар. Важно уточнить порядок появления рвоты и поноса. При всех бактериальных острых гастроэнтеритах и токсических гастритах вначале появляется рвота, а затем спустя несколько часов – понос. При холере наоборот, вначале появляется понос, а затем рвота (без других признаков гастрита). Для холеры характерна такая потеря жидкости с испражнениями и рвотными массами, которая в очень короткий срок (часы) достигает объема, практически не встречающегося при диареях другой этиологии – в тяжелых случаях объем теряемой жидкости может превышать массу тела больного холерой.

В менее типичных случаях основу диагностики составляет бактериологическое исследование материала от всех лиц, подозрительных на холеру по эпидемическим критериям. Большую трудность представляют нередкие случаи микст-инфекции (холера + другие диарейные инфекции, холера + глистная инвазия и т.д.).

При наличии эпидемических данных диагноз холеры не представляет трудностей. Большое значение имеет активное выявление в окружении больных и в эпидемических очагах лиц с дисфункцией кишечника, которые должны рассматриваться как подозрительные на холеру. Однако установление окончательного диагноза возможно только после получения результата бактериологического исследования, требующего 36—48 ч.

Лабораторная диагностика

Основу лабораторной диагностики составляет бактериологическое исследование испражнений и рвотных масс, проводимое в несколько этапов. В качестве ориентировочного теста производят микроскопию фиксированных окрашенных мазков испражнений и рвотных масс. Скопления вибрионов имеют вид стаек рыб.

Для анализа могут быть также использованы загрязненное больными бельё, секционный материал (содержимое тонкой кишки и желчного пузыря). При контрольном обследовании реконвалесцентов проводят бактериологический анализ испражнений и трех порций желчи, взятых при дуоденальном зондировании.

В качестве ускоренных методов применяют иммунофлуоресцентную микроскопию, метод раздавленной капли на том же материале. Для посева используют среды обогащения, элективные и дифференциально-диагностические среды. Результаты экспресс-анализа получают через 2–6 ч (ориентировочный ответ), ускоренного анализа через 8–22 ч (предварительный ответ), полного анализа через 36 ч (заключительный ответ). Существенным недостатком классических методов лабораторной диагностики является сравнительно большая продолжительность всего периода идентификации возбудителя.

При подозрении на холеру применяют ускоренные методы бактериологической диагностики: люминесцентно-серологический, иммобилизации вибрионов холерной О-сывороткой с последующей микроскопией в темном поле и др. Анализ занимает от 15 минут до двух часов. К методам экспресс-диагностики также можно отнести выявление антигенов холерных вибрионов в исследуемом материале в реакции агглютинации (РА), реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) коагглютинации (РКА), реакции латекс-агглютинации (РЛА), иммуноферментном анализе (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Многочисленные серологические методы диагностики могут иметь ориентировочное и эпидемиологическое значение, но окончательным доказательством диагноза их не считают. Часто серологические методы используются для ретроспективной диагностики.

Рефераты и конспекты лекций по географии, физике, химии, истории, биологии. Универсальная подготовка к ЕГЭ, ГИА, ЗНО и ДПА!

Микробиологическая диагностика холеры

Возбудитель Vibrio cholerae входит в семью Vibrionaceae, рода Vibrio. Наибольшее значение в патологии человека имеют 2 биоварами: V. cholerae и V. Eltor.

Материалом для исследования от больных является стул и рвотные массы, а от вибрионосителей — стул В ру, погибших от холеры исследуют тонкий кшечник и желчный пузырь (секционный материал). С Объекта окружающей среды изучается вода открытых водоемов и воды стоков.

В микробиологической диагностике холеры используют экспресс-метод, бактериологический и серологический методы.

Экспресс-метод диагностики. Позволяет выявить холерный вибрион непосредственно в материале, который исследуется. Для этого используют РИФ (см. Приложение).

Для быстрого обнаружения холерного вибриона используют также РОПГА с антительным эритроцитарных диагностикумом и цепную полимеразной реакции (ПЦР). (См. Приложение). Бактериологический метод. Является основным методом диагностики холеры. Выделение чистой культуры вибриона и его идентификацию проводят круглосуточно в специализированной лаборатории. Окончательный ответ должен быть предоставлен через 36 часов от начала исследования.

При проведении бактериологического метода диагностики необходимо соблюдать следующие требования.

1. Посев материала лучше выполнять у постели больного, поскольку холерный вибрион плохо сохраняется в испражнениях больных и носителей.

2. Посуда, в который собирают исследовательский материал, не должен обеззараживанию химическими веществами, поскольку вибрион к ним очень чувствителен.

3. Необходимо исключить возможность заражения окружающих и загрязнения объектов окружающей среды.

Висел стула или иного материала, который исследуется выполняют у постели больного или непосредственно на месте отбора материала на 1% щелочную пептонную воду (ПВ) и доставляют в специализированную лабораторию с соблюдением всех правил безопасности в сопровождении медицинского персонала. После 6 часовой инкубации высева на 1% пептонной воде образуется хрупкая пленка с немного голубым оттенком, которая во время встряхивания пробирки легко разрушается и оседает на дно.

Смотрите так же:  У ребенка врожденный гепатит с

Изготовлен из пленки мазок по Граму, микроскопируют. Кроме того содержание пленки изучают под микроскопом в препарате «висящая» или «раздавленная» капля и ставят с ним реакцию агглютинации на стекле с О-холерной сывороткой. Возбудители холеры грамотрицательные, имеют палочковидную форму, слегка изогнутые, подвижные.

Независимо от полученного результата, исследования продолжают по следующей схеме: содержание пленки пересевают второго 1% щелочную ПВ и щелочной МПА или среду TCBS, которое является лучшим селективным средой для холерных вибрионов, поскольку сопутствующая флора на нем не растет. На фоне голубовато-серого цвета этой среды образуются колонии холерных вибрионов с желтым оттенком. Вторую ПВ инкубируют 6:00 при t 37 ° С и проводят исследования по той же схеме.

В случае выявления в пленке грамотрицательных подвижных палочек, которые аглютинуються О-холерной сывороткой, делают предварительный вывод, что обнаружен холерный вибрион, и продолжают исследования дальше. Со второй ПВ делают еще раз пересел на щелочной МПА.

Подозрительными считают мелкие, гладкие, стекловидное-прозрачные колонии с едва заметным голубоватым оттенком, которые выросли за 12:00 на щелочной МПА.

Чистую культуру выделяют на лактозо-цукрозному среде и культивируют 12:00 при t 37 ° С. Отбирают колонии и ставят пробу на оксидазу. При культивировании на элективных средах проба на оксидазу не делается.

Идентификация чистой культуры проводится по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, подвижностью и окончательным типированием с помощью диагностических агглютинирующих сывороток О, OR, Инаба, Огава и бактериофагов.

Окончательный ответ об обнаружении того или иного биовара холерного вибриона возможна при:

1. Выявленные подвижных грамотрицательных немного изогнутых палочек, которые выросли в пленке через 6:00 инкубации на второй ПВ;

2. Выявленные мелких, стекловидное прозрачных колоний, выросших из 12:00 на щелочной МПА и дают положительную реакцию на оксидазу;

3. Изменения цвета лактозо-цукрозного среды в нижней части «столбика» без наличия пузырьков газа;

4. Ферментации углеводов: сахарозы (+), арабинозы (-), маннозы (+).

5. Положительному феномене агглютинации с О-и OR- холерными сыворотками Инаба и Огава.

Серологический метод. Носит вспомогательный характер. Обнаруживают специфические антитела в сыворотке крови больного в РА, РПГА, ИФА, РИФ (косвенная). Токсиннейтрализуючи антитела появляются на 5-6 день болезни и достигают максимума на 14-21 сутки. Диагностическим титром в РПГА считается разведение 1: 160.

Микробиологическая диагностика холеры

Холера — особо опасное, карантинное инфекционное заболевание, вызываемое Vibrio cholerae биоваров cholerae и eltor, проявляющееся в виде острого гастроэнтерита с выраженной интоксикацией и обезвоживанием (эксикозом) в результате нарушения водно-электро­литного обмена, cвязанного с выработкой вибрионами холерного энтеротоксина (холерогена).

Основной метод лабораторной диагностики холеры – бактериологический.

При выполнении исследований на холеру необходимо строго соблюдать требования противоэпидемического режима. Материал для исследования на холеру собирают в стерильную посуду, не содержащую следов дезинфицирующих растворов, упаковывают и достав­ляют в лабораторию. Банки, пробирки должны быть герметично закрыты водонепроницаемыми пробками, которые заливают парафином, посуду обвязывают двойным слоем вощеной бумаги и обрабатывают дезинфицирующим раствором. В направ­лении указывают фамилию, инициалы, возраст больного, его домашний и служебный адрес, диагноз, даты начала болезни и госпитализации, дату и час взятия материала, а также фамилию и инициалы лица, направившего анализ. Банки и пробирки с материалом для исследования перекладывают ватой, помещают, в металлическую коробку, а затем в деревянный ящик, который пломбируют, надписывают «Верх, осторожно» и на служебном транспорте с сопровождающим лицом пересы­лают в лабораторию в течение 2 часов после взятия проб.

Исследования на холеру проводятся круглосуточно в специальной лаборатории медицинскими работниками, прошедшими подготовку по особо-опасным инфекциям. Методы, применяемые для микробиологической диагностики холеры, представлены в схеме 13.

Микроскопический метод (микроскопия окра­шенных мазков и препаратов «висячей капли» из мате­риала от больного) при холере в настоящее время не применяется в связи с низкой его информативностью. Разработаны методы экспресс-диагностики холеры (РИФ).

Бактериологический метод состоит из нескольких этапов.

Первый этап. Исследуемый материал засевают на щелочные (элективные) плотные питательные среды (щелочной агар Монсура – МПА с триптиказой, хлоридом на­трия, таурохолатом натрия, карбонатом натрия; TCBS — тиосульфат-цитрат-бромтимол-сахарозный агар;ще­лочной МПА) и жидкие среды обогащения (1% щелочная пептонная вода).

Второй этап проводится через 6 —8 ч от начала анализа. Выполняют пересев из верхней части 1-й среды накопления на плотные элективные питательные среды и на 2-ю среду накопления. При наличии на 1-й пептонной воде нежной голубоватой пленки из нее готовят мазок в окраске по Граму, в котором обнаруживают грамотрицательные изогнутые в виде «запятой» вибрионы, проверяют подвижность, ставят ОРА с холерны­ми сыворотками О-1, О-139 и RO, а также специфическую иммунофлюоресценцию.

Третий этап выполняется через 12— 14 ч от начала анализа. Производится пересев из верхней части 2-й среды накопления на плотные элективные питательные среды. Изучают и отбирают для исследования типичные для холерного вибриона колонии на плотных средах, засеянных нативным материалом.

Схема 13.Микробиологическая диагностика холеры

Четвертый этап. (через 18-24 ч от начала анализа). Изучают и отбирают с помощью стереомикроскопа типичные для холерного вибриона колонии на всех плотных средах. Хо­лерный вибрион образует прозрачные, круглые, диаметром 1-2 мм, гладкие, пло­ские, го­могенные, с ровными краями колонии, имеющие голубоватый оттенок и маслянистую кон­систенцию. На агаре TCBSколонии холерного вибриона ярко-желтые на зеленом фоне среды, на сре­де Монсура — полупрозрачные бесцветные с темным центром. Колонии проверяют на наличие оксидазы (холерные вибрионы оксидазоположительны), ставят РА на стекле с холерны­ми сыворотками О-1, О-139 и RO, а также специфическую иммунофлюоресценцию.

Положительная РА или ИФМ в сочета­нии с типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами выделенной культуры позволяет вы­дать предварительный положительный ответ.

Пятый этап проводится через 24 —36 ч от начала исследования. На этом этапе изучают и отбирают характерные для холерного вибриона культуры на среде Ресселя, на которой холерный вибрион расщепляет сахарозу, что сопровождается покраснением среды в столбике без образования газа, но не ферментирует лактозу (отсутствие изменений скошенной части среды). Со среды Ресселя готовят мазки в окраске по Граму с целью обнаружения характерных по морфологическим свойствам вибрионов, проверяют наличие подвижности и оксидазы, ставят РА с холерными сыворотками (О-1, RO,Огава, Инаба, при отрицательном результате — с сывороткой О-139) и при наличии положительных результатов выдают ответ о выделении соответствующего холерного вибриона.

Окончательную идентификацию оксидазопопожительных культур проводят, используя сокращенную или полную схемы (табл. 15).

Таблица 15.Дифференциация холерных вибрионов

Сокращенная схема предполагает постановку развернутой РА с сыворотками Инаба и Огава, пробы с диагностическими холерными фагами, определение ферментативной группы по Хейбергу. Полная схема дополнительно включает тесты для дифференциации биоваров холерного вибриона (классического и Эль-Тор), в частности, определение гемагглютинирующих и гемолитических свойств, чувствительности к полимиксину, способности давать положительную реакцию Фогес-Проскауэра (образование ацетилметилкарбинола — ацетоина из глюкозы). Ацетоин определяют добавлением в культуру, выращенную на глюкозо-фосфатном бульоне Кларка, 5% α-нафтола и 40%-го гидроксида калия; при встряхивании пробирок среда окрашивается в розовый или рубиново-красный цвет.

Для ускоренной биохимической идентификации холерных вибрионов и их дифференциации от холероподобных и нехолероподобных вибрионов используют систему индикаторных бумажных дисков (СИБ), в состав которой входят тесты на оксидазу, индол, ферментацию лактозы, глюкозы, саха­розы, маннозы, арабинозы, маннита, инозита, аргинина, лизи­на и орнитина.

Смотрите так же:  Таблетки для лечения хламидиоза

Шестой этап (выполняется через 36-48 ч от начала анализа) — окончательная идентификация выделенных куль­тур, определение их чувствительности к антибиотикам, формулировка окончательного ответа о выделении холерного вибриона с указанием биовара, серогруппы (серовара) и эпидемической значимости по косвенным биологическим признакам (гемолитической активности, группе Хейберга и др.). Типичные куль­туры Vibrio cholerae представляют собой грамотрицательные изо­гнутые в виде запятой или прямые полиморфные активно подвижные палочки, обладающие оксидазой, разлагающие глюкозу с образованием кислоты без газа, декарбоксилирующие лизин и орнитин, но не ферментирующие аргинин, принадлежа­щие к 1-й (реже 2-й) группе Хейберга, агглютинирующиеся хо­лерными сыворотками и лизирующиеся диагностическими фагами. Если выделенная культура не агглютинируется сыворотками к О1 и О139, ее относят к группе НАГ-вибрионов, а при наличии соответствующих сывороток определяют ее принадлежность к другой серогруппе. Токсигенные штаммы холерных вибрионов серогрупп Ои О139 обычно не лизируют бараньи эритроциты, относятся к 1-й группе Хейберга (ферментируют маннозу и сахарозу, но не арабинозу), лизируются определенными фагами в комплексном методе с применением ХДФ.

Вирулентность холерных вибрионов определяют в специализированных лабораториях путем внутрикишечного заражения кроликов-сосунков, а также методами генодиагностики (ПЦР или ДНК-ДНК-гибридизация с целью определения гена, ответственного за выработку токсина).

Серодиагностикаявляет­ся дополнительным методом лабораторной диагностики холеры. Исследуют пар­ные сыворотки крови больных, взятые с интервалом в 6-8 дней, с целью выявления агг­лютининов с помощью РА (диагностический титр 1:40 и выше), антитоксинов с помощью РНГА с эритроцитарным холерным энтеротоксическим диагностикумом (диагностический титр — 1: 160) и вибриоцидных антител с помощью реакции иммобилизации вибрионов (диагностический титр1:1000). Учитывается также нарастание титра антител (не менее чем в 4 раза) в процессе инфекции.

Экспресс-диагностика-прямая и непрямая РИФ с использованием специфических О-холерных сывороток серогрупп 01 и 0139, меченых изотиоцианатом флюоресцеина; РНГА со специфическими иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами. Ставят также реакцию иммобилизации вибрионов с теми же сыворотками (2 капли материала наносят на предметное стекло, в одну из них вносят каплю сыворотки О1 или О139 в разведении 1: 100, в другую каплю ФР — контроль). Готовят препараты «раздавленной» капли, которые исследуют с помощью темнопольного, фазово-контрастного или обычного микроскопа с опущенным конденсором при увеличении 400 — 600. Положительная реакция характеризуется по­терей подвижности вибрионов и их склеиванием.

Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопический метод. Промикроскопировать и зарисовать демонстрационный микропрепарат холерного вибриона V.cholerae, окрашенный по Граму. Холерный вибрион — грамотрицательная изогнутая палочка.

2. Бактериологический метод. Ознакомиться с ос­новными биологическими свойствами классического биовара холерного вибриона и биовара Эль-Тор:

· фаголизабельность. Классический холерный вибрион лизируется фагом С и нечувствителен к действию фага Эль-Тор II. Вибрион Эль-Тор лизируется фагом Эль-Тop и нечувствителен к фагу С (демонстрация);

· чувствительность к полимиксину. Учесть рост классического холерного вибриона и вибриона Зль-Тор на среде с добавле­нием полимиксина. Вибрион Эль-Тор к полимиксину не чувствителен, классический холерный вибрион – чувствителен;

· гемолитические свойства. Вибрион Эль-Тор лизирует эритроциты; классический холерный вибрион, как правило, нет (демонстрация);

· определение серовара холерного вибриона. Учесть разверну­тую реакцию агглютинации c сыворотками Инаба и Огава (демонстрация).

3. Изучить биопрепараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики бактериальной дизентерии и холеры:

· люминесцирующая хо­лерная сыворотка для постановки реакции иммунофлюоресценции с целью выявления вибрионов;

· агглютинирующие холерные сыворотки Инаба и Огава (для постановки реакции агглютинации при идентифика­ции холерного вибриона);

· холерные фаги: классический (фаг С) и Эль-Тор. Использу­ются для фагодиагностики;

· поливалентный холерный бактериофагдля лечения и профилактики;

· холерная вакцина.Создано 3 вакцины против холеры (убитая Эль-Тор; холероген- анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона для подкожных инъекций; холероген-анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона таблетированный). Используются для специфи­ческой профилактики холеры.

37.112.96.50 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

Методы экспресс-диагностики холеры.

Микроскопия материала от больного в фазово-контрастном или темнопольном микроскопе, РИФ. При достаточно большом количестве вибрионов обнаруживается интенсивное движение и обездвиживание в капле с холерными О1 и О139 сыворотками (1:50) (реакция иммобилизации). В мазках, которые фиксируют этиловым спиртом или смесью Никифорова и окрашивают по Граму или карболовым фуксином (1:10), обнаруживают типичные вибрионы, дающие положительную РИФ с люминесцирующей сывороткой. Это позволяет дать первичный сигнальный ответ через 15-20 мин от начала исследования нативного материала.

Целесообразно применять ПЦР со специфическими праймерами.

Специфическая профилактика, основы патогенетической терапии холеры.Вопрос о целесообразности применения для иммунизации живой вакцины окончательно не решен. Убитая вакцина обладает защитным действием, но уровень и продолжительность противомикробного иммунитета довольно низкие, особенно у детей (иммунитет ослабевает через 3-4 месяца после вакцинации, а через год полностью исчезает). Для специфической профилактики используют также холероген-анатоксин и холерный бактериофаг.

Направления терапии: 1. патогенетическое – регидратация; 2. симптоматическое – борьба с нарушением ССС, почек; 3. антимикробное – тетрациклины, хлорамфеникол, фторхинолоны.

Дата добавления: 2015-01-29 ; просмотров: 915 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

Экспресс-методы диагностики холеры

Основу диагностики холеры составляют выделение и идентификация возбудителя. Цели исследований на холеру — выявление больных и вибрионосителей; установление причины смерти при исследовании трупов; контроль над эффективностью лечения больных и санации носителей, контроль над объектами внешней среды и эффективностью дезинфекционных мероприятий. Материал для исследований — испражнения, рвотные массы, жёлчь, секционный материал (фрагменты тонкой кишки и жёлчного пузыря), постельное и нательное бельё, вода, ил, сточные воды, гидробионты, смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты, мухи и др.

При проведении исследований на холеру необходимо соблюдать следующие правила:

Материал исследований на холеру следует доставлять в лабораторию не позже 2 ч после забора (так как возбудитель быстро погибает, особенно в испражнениях). При невозможности срочной доставки образцы помещают в транспортные среды (1% пептоннан вода с рН 8,2-8,6).

• Ёмкости для материала нельзя обеззараживать химическими веществами, так как возбудитель чувствителен даже к их следовым количествам. Все образцы помещают в герметически закрываемую транспортную тару.

Посев холеры проводят на жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально-диагностические среды (например, TCBS-arap). Изучают рост на первой среде накопления и выполняют высев на щелочной агар и вторую среду накопления (что повышает высевае-мость возбудителя). Если на первом этапе при исследовании нативного материала ускоренными методами получают положительные результаты, пересев на вторую среду накопления не проводят. Подозрительные колонии пересевают для выделения чистых культур.

Затем определяют морфологические, биохимические свойства и антигенную структуру холеры с помощью агглютинирующих О-, OR-, Инаба- и Огава-антисывороток. Важное диагностическое значение имеет типирование с помощью холерных диагностических бактериофагов. Все V. cholerae лизируются бактериофагом IV группы, а вибрионы биовара Эль-Тор — фагами группы V.

• Для ускоренной диагностики холеры применяют иммунолюминесцептный и иммобилизационный методы и РАГА с диагностикумом. Нецелесообразно проводить бактериоскопию мазков и препаратов методом «висячей капли» из нативного материала.

• Для ускоренной биохимической идентификации возбудителя холеры предложен набор СИБ из 13 тестов (оксида-за, индол, лактоза, глюкоза, сахароза, манноза, арабиноза, маннит, инозит, аргинин, орнитин, лизин), дифференцирующий от представителей семейства Enterobacteriaceae, бактерий родов Plesiomonas, Aeromunas и др.

Смотрите так же:  Спид центр ярославль проспект октября

• При выделении Vibrio cholerae группы, отличной от 01, возбудитель необходимо типировать с помощью других антисывороток. При выделении таких бактерий от больного с диареей обязательным считают проведение всего объёма исследований дли диагностики холеры.

• Определение AT в крови больных холерой носит вспомогательный характер. Их выявляют в РА, а также путём обнаружения вибриоцидных AT и антитоксинов.

Лечение холеры. Профилактика холеры.

Восполняют потерю жидкости и электролитов, проводят антибактериальную терапию холеры препаратами тетрациклинового ряда. Альтернативные антибактериальные препараты — левомицетин, ко-тримоксазол и фуразолидон.

Профилактика холеры включает организацию санитарно-гигиенических мероприятий, предупреждающих занос заболевания; проведение санитарно-просветительной работы среди населения; раннее выявление больных и носителей; массовое профилактическое назначение тетрациклинов в районах эпидемической опасности.

Для специфической иммунопрофилактики холеры разработаны убитая вакцина из штаммов Огава и Инаба, холероген-анатоксин для подкожного введения и бивалентная вакцина из анатоксина и О-Аг Огава и Инаба. Эффективность их использования не превышает 60-70%, невосприимчивость сохраняется в течение 3-6 мес, поэтому вакцин опрофилактику применяют по эпидемиологическим показаниям.

В очагах холеры хороший эффект даёт профилактический приём тетрациклина.

Микробиологическая диагностика холеры (Критерии принадлежности холеры к группе особо опасных инфекций. Специфическая профилактика, основы патогенетической терапии холеры)

Страницы работы

Фрагмент текста работы

Классификацию, морфо-биологические особенности возбудителя холеры.

3. Особенности экологии, эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при холере.

4. Правила забора и транспортировки материала при диагностике холеры.

5. Методы микробиологической диагностики холеры.

6. Специфическую профилактику холеры.

7. Этиотропную терапию холеры.

1. Провести экспресс-диагностику холеры (РИФ).

2. Готовить нативный препарат «раздавленная капля» для определения подвижности и последующей иммобилизации вибрионов холерной сывороткой.

3. Микроскопировать нативный препарат методом фазового контраста.

4. Идентифицировать и дифференцировать холерные вибрионы.

1. Критерии принадлежности холеры к группе особо опасных инфекций. Правила ТБ при работе с возбудителями особо опасных инфекций.

2. Классификация и морфо-биологические особенности возбудителя холеры.

3. Экология, источники, пути распространения, особенности патогенеза и иммунитета при холере.

4. Правила забора и доставки материала при диагностике холеры, как особо опасной инфекции.

5. Методы микробиологической диагностики холеры.

6. Методы экспресс-диагностики холеры.

7. Специфическая профилактика, основы патогенетической терапии холеры.

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

1. Провести бактериологическое исследование испражнений обследуемого с подозрением на холеру с целью выделения предполагаемого возбудителя:

1.1.Учесть и оценить результаты РИФ с материалом отобследуемого и холерной люминесцирующей сывороткой. Сделать вывод;

1.2.Изучить посев исследуемого материала на щелочной агар:

— отобрать характерные изолированные колонии, дать их описание;

— приготовить фиксированный препарат из характерной изолированной колонии, окрасить его по Граму, промикроскопировать;

— поставить и учесть РА на стекле с О-холерной сывороткой(1:50);

— определить подвижность микроорганизмов в нативном препарате «раздавленная капля» методом фазового контраста, а затем поставить реакцию иммобилизации;

1.3.Описать характер роста выделенной культуры на среде Клиглера; учесть и оценить результаты теста на оксидазу.

1.4.Учесть и оценить результаты:

— посева на «пестрый ряд», среду с полимиксином;

— реакции гемолиза с эритроцитами барана;

— реакции фаголизиса с классическим бактериофагом и фагом Эль-тор;

— развернутых РА с холерной О-сывороткой и сыворотками Огава и Инаба;

2. Охарактеризовать биопрепараты: холерная агглютинирующая О-сыворотка, типовые агглютинирующие сыворотки Огава и Инаба, люминесцирующая холерная сыворотка, холерные фаги — классический «С» и эльтор, холерная вакцина, холероген-анатоксин.

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

1. Проведите поэтапное бактериологическое исследование по обнаружению и выделению предполагаемого возбудителя из испражнений, взятых у больных с подозрением на холеру.

1 этап: Учтите и оцените результаты РИФ с материалом отобследуемого и холерной люминесцирующей сывороткой. Сделайте вывод.

Холера относится к особо опасным инфекциям, поэтому работа должна выполняться только специально подготовленным персоналом при тщательном соблюдении всех правил работы с возбудителями ООИ.

Испражнения забирают из предварительно тщательно отмытого от дезраствора судна или с помощью ректальной петли. Наилучшей транспортной средой является 1% пептонная вода с рН 8,2-8,6. Материал необходимо доставить в лабораторию не позднее 2-х часов.

Экспресс-методом является РИФ с люминесцирующей холерной сывороткой и исследуемым материалом (демонстрация). Техника выполнения: приготовленный препарат на стекле помещают

Холера — причины, симптомы, диагностика, лечение

Холера — это острое инфекционное заболевание, характеризующееся поражением тонкого кишечника, расстройством водно-солевого обмена, разной степенью обезвоживания, вследствие потери жидкости, с рвотными массами и водянистыми испражнениями. Холера относится к карантинным инфекциям. Возбудителем болезни является холерный вибрион, напоминающий внешним видом изогнутую палочку (запятую).

При кипячении вибрион гибнет через одну минуту. Некоторые биотипы способны длительно сохраняться и размножаться в иле, йоде, в организмах обитателей водоёмов. Источник инфекции — человек (бациллоноситель и больной). Вибрионы выделяются с рвотными массами и фекалиями. Эпидемии холеры бывают контактно-бытовые, пищевые, водные и смешанные. Восприимчивость к болезни достаточно высокая.

Холера — причины

Заболевание вызывается холерным вибрионом. Пути передачи от больного человека — обычно через воду, загрязнённую рвотными массами и фекалиями, как правило, при купании в водоёме, либо заглатывании воды. Заражение холерой может произойти при употреблении различных продуктов питания, которые были помыты заражённой водой. В наши дни холера встречается достаточно редко, обычно в виде эпидемий в районах, которые отличаются неблагоприятными санитарными условиями (Африка, Азия).

Холера — симптомы

Продолжительность инкубационного периода холеры составляет около 5-ти дней. Заболевание начинается внезапно. Токсин холерного вибриона провоцирует сильную диарею, при которой вместе с калом выделяется огромное количество жидкости. Слизи, примесей крови и болей не наблюдается. Стул сначала кашицеобразный, затем — бесцветный, позже к симптомам добавляется обильная рвота.

Возникает острое обезвоживание всего организма, нарушаются обменные процессы, происходит понижение уровня калия, вследствие чего изменяется сердечный ритм. Кожа теряет эластичность, у больного наблюдается заторможенность, заостряются черты лица, появляются судороги жевательных и икроножных мышц. Результатом обезвоживания может стать смерть от почечной недостаточности, гиповолемического шока, комы.

Холера — диагностика

При постановке диагноза большое значение уделяется эпидемиологическим данным, которые позволяют установить вероятность контакта с возбудителем холеры, а также клинические данные (симптомы холеры). Однако, наибольшее значение придаётся данным лабораторной диагностики, позволяющие подтвердить диагноз.

Методы диагностики холеры разделяют на классические (бактериологическое исследование и бактериоскопия) и экспресс-методы (микроагглютинация и иммобилизация вибрионов). Холеру необходимо дифференцировать с прочими кишечными инфекциями, такими, как сальмонеллёз и дизентерия, а также с отравлениями солями тяжёлых металлов и грибами.

Холера — лечение и профилактика

Обязательна госпитализация всех больных. Основная роль при лечении холеры отводится восстановлению водно-солевого равновесия и борьбе с обезвоживанием. Рекомендуются растворы, которые содержат хлорид калия, глюкозу, хлорид натрия и бикарбонат натрия. При особо тяжёлом обезвоживании больным показано струйное введение жидкости, чтобы нормализовать пульс, после чего раствор вводят капельным путём.

Рацион питания больного должен состоять из продуктов, богатых на содержание солей калия (томаты, курага, картофель). Антибиотикотерапию проводят только больным с высокой степенью обезвоживания, используются левомицетин или тетрациклин. Выписка из стационара проводится после полного выздоровления. Прогноз при адекватном и своевременном лечении благоприятный.

Профилактика холеры состоит в обеззараживании и охране питьевой воды. Необходим активный врачебный контроль за лицами, которые находились в контакте с больными. С целью профилактики по показаниям применяется холероген-анатоксин и корпускулярная холерная вакцина.